根癌农杆菌介导蓝猪耳转化的影响因素研究

亚热带植物科学 ›› 2008, Vol. 37 ›› Issue (02): 17-20.

根癌农杆菌介导蓝猪耳转化的影响因素研究

龙海涛,李洪清,李玲

华南师范大学生命科学学院广东省植物发育生物工程重点实验室, 广东广州 510631

收稿日期:2007-11-13 出版日期:2008-06-10 发布日期:2008-06-10
作者简介:龙海涛(1979-),男,湖南邵阳人,助教,硕士,从事生化与分子生物学研究。
基金资助:
广东省自然科学基金项目(003062)资助

Optimization of Agrobacterium-mediated Transformation System for Torenia fournieri

LONG Hai-tao, LI Hong-qing, LI Ling

Guangdong Key Laboratory of Biotechnology for Plant Development, College of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631, Guangdong China

Received:2007-11-13 Online:2008-06-10 Published:2008-06-10

摘要/Abstract

摘要： 研究了根癌农杆菌介导蓝猪耳转化的影响因子。结果表明,以蓝色花类型蓝猪耳5~6周的叶片为外植体,在OD₆₀₀为0.5~0.6的活化菌液中浸染5~10min,暗培养4d后,在愈伤组织诱导培养基(MS+BA 1.0mg/L+2,4-D 0.1mg/L)上生长14d,获得抗性愈伤组织;经芽诱导培养基(1/2MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L)培养28d得到抗性芽;生根培养基(1/2MS)上培养14d得到抗性植株。经PCR检测证实外源基因已整合到蓝猪耳基因组中,转化率达13%~14%。Cef和Hyg浓度对转化影响较大,转化的不同阶段其适宜浓度不同。

关键词: 蓝猪耳, 根癌农杆菌, 转化, 影响因子

Abstract: An efficient and stable Agrobacterium-mediated transformation system for Torenia was established through investigating the factors influencing the transformation efficiency. Genetic transformation of Torenia was performed by using 5~6 week leaflet as explants. After incubation in Agrobacterium suspension of OD₆₀₀ at 0.5~0.6 for 5~10min, the explants were co-cultivated on co-culture medium containing 200μmol/L acetosyringone for 4d under dark. The explants were then transferred to the calla induction agar medium MS+BA 1.0mg/L+2,4-D 0.1mg/L, and cultivated for 14d to obtain the resistant calla. The resistant calla were transferred to the shoot induction agar medium 1/2MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L, and cultured for another 28d to obtain resistant shoots. The 0.5cm or taller resistant shoots were finally transferred to rooting agar medium, and the resistant plantlets were achieved after 14d cultivation. Hygromycin-resistant plants were confirmed to be positive transformants by PCR. The transformation frequency was up to 13%~14% overall.

Key words: Torenia fournieri, Agrobacterium tumefacien, transformation, factor

中图分类号:

Q943

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