早熟砂梨ISSR-PCR反应体系的建立与优化

doi:10.3969/j.issn.1009-7791.2013.02.001

亚热带植物科学 ›› 2013, Vol. 42 ›› Issue (02): 91-96.DOI: 10.3969/j.issn.1009-7791.2013.02.001

早熟砂梨ISSR-PCR反应体系的建立与优化

宋燕春,李永裕,陈建烟,黄添毅,龚理,吴少华

福建农林大学园艺学院，福建福州 350002

收稿日期:2013-01-19 修回日期:2013-01-19 出版日期:2013-06-10 发布日期:2013-06-10
通讯作者: 吴少华
作者简介:宋燕春(1986-)，男，四川泸州人，硕士研究生，从事园艺植物分子生物学研究。
基金资助:
高等学校博士学科点专项科研基金(20113515110011)、福建省科技计划重点项目(2012N0005)

Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System in Precocious Pyrus pyrifolia

SONG Yan-chun,LI Yong-yu,CHEN Jian-yan,HUANG Tian-yi,GONG Li,WU Shao-hua

College of Horticulture, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, Fujian China

Received:2013-01-19 Revised:2013-01-19 Online:2013-06-10 Published:2013-06-10
Contact: WU Shao-hua

摘要/Abstract

摘要： 以我国南方主栽的早熟砂梨品种‘翠冠’Pyrus pyrifolia ‘Cuiguan’为材料，对ISSR技术体系中的模板DNA浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、退火温度、PCR循环数等7个主要因素进行优化和筛选，建立了适合早熟砂梨的ISSR-PCR反应体系。最终反应体系为20 μL体系中10×PCR buffer（不含Mg2+）2 μL，模板DNA浓度60 ng，TaqDNA聚合酶0.75 U，引物浓度1 μmol/L，dNTP浓度90 μmol/L，Mg2+浓度2.25 mmol/L。扩增程序为：预变性94 ℃ 5 min，变性94 ℃ 45 s，退火45 s，72 ℃延伸1 min，共42个循环，然后72 ℃再延伸10 min，4 ℃保存，用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测多态性。

关键词: 早熟, 砂梨, ISSR, 体系优化

Abstract: To obtain 7 factors (DNA template dosage, Taq DNA polymerase dosage, primer concentration, dNTP concentration, Mg2+ concentration, annealing temperature and PCR cycles ) of ISSR-PCR Reaction System in Pyrus pyrifolia ‘Cuiguan’, a precocious cultivar of southern China was been used as template. An optimum reaction system was been established. The final total volume was 20 μL, contains 2 μL 10×PCR buffer (Mg2+ free), 60 ng DNA template, 0.5 U Taq DNA polymerase, 1 μmol/L of primer concentration, 90 μmol/L of dNTP concentration, 2.25 mmol/L of Mg2+ concentration. Amplication procedure was as follows: initial-denaturing of 5 min at 94 ℃, followed by 42 cycles of 45 s for denaturing at 94 ℃, at annealing temperature for 45 s and 1 min at 72 ℃, after that 10 min extending at 72 ℃, and then keep at 4 ℃. Use 1.5% of agarose gel electrophoresis to test the genetic polymorphism.

Key words: precocity, Pyrus pyrifolia, ISSR, system optimization

中图分类号:

Q943.2

宋燕春,李永裕,陈建烟,黄添毅,龚理,吴少华. 早熟砂梨ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. 亚热带植物科学, 2013, 42(02): 91-96.

SONG Yan-chun,LI Yong-yu,CHEN Jian-yan,HUANG Tian-yi,GONG Li,WU Shao-hua. Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System in Precocious Pyrus pyrifolia[J]. Subtropical Plant Science, 2013, 42(02): 91-96.

参考文献

[1] 潘芝梅,李志豪,朱伟清. 14个南方早熟梨在浙江云和的栽培表现[J]. 安徽农业科学, 2006,34(15): 3655-3656.

[2] 沈莉. 介绍3个早熟梨新品种[J]. 北京农业, 2009(12): 26.

[3] 孟玉平. 晚熟、特大果型日本梨品种—日光梨[J]. 山西果树, 2011(1): 61.

[4] 刘遵春,廖明安. 金花梨基因组DNA提取方法及部位的比较研究[J]. 安徽农业科学, 2005,33(11): 2062-2063.

[5] 曹丽,曲柏宏,王成. 一种新的梨基因组DNA提取方法及其应用[J]. 湖北农业科学, 2006,45(3): 273-275.

[6] 吴炼,于晓英,熊兴耀,等. 砂梨的ISSR-PCR 反应体系的建立与优化[J]. 中国农学通报, 2010,26(23): 254-258.

[7] 王景雪,高武军. 一种简便实用的植物总DNA提取方法[J]. 山西大学学报(自然科学版), 2000,23(3): 271-272.

[8] Green M J, Thompson D A, MacKenzie D J. Easy and efficient DNA extraction from woody plants for the detection of phytoplasmas by polymerase chain reaction[J]. Plant Disease, 1999,83(5): 482-485.

[9] 董晓莉,汤浩茹,陈清,等. 树莓基因组DNA的提取及ISSR反应体系的正交优化[J]. 中国农学通报, 2009,25(14): 27-31.

[10] Gelfand D H. Taq DNA polymerase[M]//Erlich H A. PCR Technology: principles and applications for DNA amplifications. New York: Stockton Press, 1989: 17-22.

[11] 廖丽,郭巧生. 夏枯草ISSR分子标记技术的建立与体系优化[J]. 中草药, 2009(7): 1131-1135.

[12] 高山,许端祥,林碧英,等. 瓠瓜ISSR-PCR反应体系优化[J]. 福建农业学报, 2008,23(2): 182-185.

[13] 李房英,黄彦晶,吴少华. 三角梅ISSR反应体系的建立和优化[J]. 海峡科学, 2010,46(10): 216-219.

[14] 姜卫兵,高光林.俞开锦,等. 近十年来我国梨品种资源的创新与展望[J]. 果树学报, 2002,19(5): 314-320.

[15] 张玉星,马艳芝,赵国芳. 简单重复序列间扩增分子标记技术及其应用[J]. 生物技术通报, 2009(9): 54-56.

编辑推荐

Metrics

闽ICP备11008787号-5　

早熟砂梨ISSR-PCR反应体系的建立与优化

Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System in Precocious Pyrus pyrifolia

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 11

编辑推荐

Metrics

[1]	陈明贤. 基于ISSR标记和数量性状的火龙果种质材料遗传多样性分析[J]. 亚热带植物科学, 2022, 51(2): 118-124.
[2]	李浩宇，杨大强，王利芬，张忠新，郑俊华，韩兆岚，朱旭君，房婉萍，尹江海. 苏州东山茶树种质资源遗传多样性的ISSR分析[J]. 亚热带植物科学, 2020, 49(03): 163-167.
[3]	黄雯，李阿池，胡应平，杨志坚，明艳林，陈辉. 福建省枳椇种质资源遗传多样性的ISSR分析[J]. 亚热带植物科学, 2019, 48(04): 314-320.
[4]	王会全，李亮，余志雄，袁亚芳，吴少华. PP2C相关基因在砂梨休眠进程中的表达分析[J]. 亚热带植物科学, 2018, 47(04): 305-311.
[5]	段帆,张欢,李珊,田忠琼,甘小洪. 利用ISSR分子标记构建濒危植物水青树核心种质[J]. 亚热带植物科学, 2018, 47(02): 101-106.
[6]	杨青,高华春,陈红丽,陈全成,徐鲜钧. 武夷山及周边地区黄精植物ISSR分子标记鉴定及HPLC指纹图谱研究[J]. 亚热带植物科学, 2017, 46(01): 25-29.
[7]	李亮,刘杭,张桂池,吴少华,李永裕. 不同低温需求量砂梨休眠相关基因PpMADS13的特征及表达模式[J]. 亚热带植物科学, 2016, 45(01): 42-47.
[8]	李开拓,钟凤林,郭志雄,潘腾飞,王江波,潘东明. 40个黄皮品种的ISSR分析[J]. 亚热带植物科学, 2009, 38(04): 22-26.
[9]	高丽,杨波,李洪林. 叶艺春兰组培苗遗传稳定性的ISSR研究[J]. 亚热带植物科学, 2007, 36(02): 13-14.
[10]	刘玉容,林松苍,杨珲昌,郑宜清,魏泽平. 六个早熟鲜食欧亚葡萄品种引种初报[J]. 亚热带植物科学, 2005, 34(02): 48-50.
[11]	马永,李楠,钟业聪,陆照甫,林鉴钊,蒋明,林平义,罗斌. 叉孢苏铁ISSR反应条件的优化及初步应用[J]. 亚热带植物科学, 2005, 34(01): 10-13.