蝴蝶兰叶片蛋白质提取及双向电泳体系优化

doi:10.3969/j.issn.1009-7791.2014.03.005

亚热带植物科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (03): 206-211.DOI: 10.3969/j.issn.1009-7791.2014.03.005

蝴蝶兰叶片蛋白质提取及双向电泳体系优化

朱小姝,叶庆生

（华南师范大学生命科学学院，广东广州 510631）

收稿日期:2014-05-04 修回日期:2014-05-04 出版日期:2014-09-10 发布日期:2014-09-10
通讯作者: 叶庆生
作者简介:朱小姝，硕士研究生，从事植物蛋白质组学研究。
基金资助:
广东省科技计划项目(2011B020304010)

Optimization of Protein Extraction and Two-dimensional Electrophoresis Conditions of the Phalaenopsis Leaves

ZHU Xiao-shu,YE Qing-sheng

(College of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631, Guangdong China)

Received:2014-05-04 Revised:2014-05-04 Online:2014-09-10 Published:2014-09-10
Contact: YE Qing-sheng

摘要/Abstract

摘要： 通过对蛋白质提取、IPG胶条选择、上样量、水化方式、聚焦条件等方面的优化，建立蝴蝶兰叶片蛋白质的双向电泳体系。结果表明，采用酚抽提法提取蝴蝶兰叶片蛋白质的纯度较高，复溶较完全；双向电泳优化体系选用24 cm pH 3～10 NL的IPG胶条，被动水化，上样量为1.35 mg，B1程序进行等电聚焦，12%分离胶进行第二向电泳，考马斯亮蓝G-250染色。该方法获得分辨率较高、重复性较好的蝴蝶兰叶片双向电泳图谱，蛋白数点多达1163个，可以满足蝴蝶兰蛋白质组学研究和分析。

关键词: 蝴蝶兰, 叶片, 双向电泳, 蛋白质

Abstract: A two-dimensional electrophoresis（2-DE）system for proteomic analysis of Phalaenopsis leaves was established by optimizing the extraction methods, parameters including the pH gradient of IPG strips, sample loading, hydration ways and isoelectric focusing conditions. The optimized system included the following steps: extracting the total protein from Phalaenopsis leaves by phenol method, separating the proteins with 24 cm pH 3—10 NL IPG strips, loading protein samples of 1.35 mg by passive hydration followed by isoelectric focusing program B1, and staining the gels by Coomassie Brilliant Blue after SDS-PAGE (12%) electrophoresis. On the basis of optimized 2-DE system of Phalaenopsis leaves, reproducible profiles with high resolution were obtained.

Key words: Phalaenopsis, leaves, 2-D electrophoresis, protein

中图分类号:

S682.31
Q512

朱小姝,叶庆生. 蝴蝶兰叶片蛋白质提取及双向电泳体系优化[J]. 亚热带植物科学, 2014, 43(03): 206-211.

ZHU Xiao-shu,YE Qing-sheng. Optimization of Protein Extraction and Two-dimensional Electrophoresis Conditions of the Phalaenopsis Leaves[J]. Subtropical Plant Science, 2014, 43(03): 206-211.

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