兰属SRAP-PCR反应体系的建立与优化

doi:10.3969/j.issn.1009-7791.2012.03.005

亚热带植物科学 ›› 2012, Vol. 41 ›› Issue (03): 21-24.DOI: 10.3969/j.issn.1009-7791.2012.03.005

兰属SRAP-PCR反应体系的建立与优化

李达,张宏志,龙岳林,蒋露,陈己任,黄笛,吕长平

1.湖南农业大学园艺园林学院，湖南长沙 410128；2.深圳市野生动植物保护管理处，广州深圳 518048

收稿日期:2012-06-02 出版日期:2012-09-10 发布日期:2012-09-10
通讯作者: 吕长平
作者简介:李达(1983-)，男，湖南长沙人，助教，硕士，从事观赏植物生物技术研究。
基金资助:
湖南省科技计划重点项目(2010NK2007)、湖南省科技厅项目(2009FJ3210)、湖南农业大学青年基金项目(10QN13)、长沙市科技局项目(K1104021-21)

Establishment and Optimization of SRAP-PCR Reaction System in Cymbidium

LI Da,ZHANG Hong-zhi,LONG Yue-lin,JIANG Lu,CHENG Ji-ren,HUANG Di,L? Chang-ping

1.College of Horticulture and Gardening, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, Hunan China；2.Shenzhen Wildlife Protecting Administration, Shenzhen 518048, Guangdong China

Received:2012-06-02 Online:2012-09-10 Published:2012-09-10
Contact: LyvChangping

摘要/Abstract

摘要： 为获得兰属清晰的SRAP标记图谱，对兰属SRAP-PCR反应体系进行了初步探讨，建立了扩增多态性高、重复性好、带型清晰的SRAP-PCR反应体系。最佳反应体系：在30 μL反应总体系中，Mg2+ 2.2 mmol/L、dNTPs 0.8 mmol/L、DNA模板150 ng、DNA聚合酶2.0 U，上、下游引物各1.5 μmol/L；扩增程序：在94 ℃预变性4 min，反应前5个循环在94 ℃变性1 min、35 ℃复性1 min、72 ℃延伸1 min的条件下运行，随后的30个循环复性温度提高至55 ℃，最后72 ℃延伸5 min．

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关键词: 兰属, DNA模板, SRAP-PCR反应体系, 优化

Abstract: To obtain clear Sequence-related amplified polymorphism (SRAP) fingerprints of Cymbidium, the factors influencing SRAP analysis were studied. A reliable, effective and reproductive PCR reaction system for detecting SRAP was developed. Each 30 μL PCR reaction mixture consisted of 2.2 mmol/μL of Mg2+, 0.8 mmol/L of dNTPs, 150 ng of genomic DNA, 1.5 μmol/L of primer and 2.0 unit of Taq polymerase. Samples were subjected to thermal profile for amplification in an oven thermocycler: 4 min of denaturing at 94 ℃, five cycles of three steps, 1 min of denaturing at 94 ℃, 1 min of annealing at 35 ℃ and 1 min of elongation at 72 ℃, in the following 30 cycles the annealing temperature was increased to 55 ℃, with a final elongation step of 5 min at 72 ℃.

Key words: Cymbidium; template DNA, SRAP-PCR, reaction system, optimization

中图分类号:

Q946-33

李达,张宏志,龙岳林,蒋露,陈己任,黄笛,吕长平. 兰属SRAP-PCR反应体系的建立与优化[J]. 亚热带植物科学, 2012, 41(03): 21-24.

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Establishment and Optimization of SRAP-PCR Reaction System in Cymbidium

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